A proteína harpin está envolvida com a patogênese de Erwinia amylovora em maçã. Utilizou-se microscopia para estudar alterações celulares induzidas pela harpin que sejam correlacionadas com a resistência de maçã contra Penicillium expansum. Microscopia de varredura da superfície de ferimentos inoculados mostrou que o fungo iniciou colonização dos ferimentos 48 h após a inoculação e que profusa colonização dos tecidos ocorreu dentro de 72 h nos controles. Nos frutos tratados com harpin, germinação de esporos e colonização dos ferimentos foram evidentes em 96 h. Somente após este tempo foi possível observar invasão dos tecidos pelas hifas que foram bloqueadas pela deposição de materiais amorfos no sítio de penetração. A microscopia de luz mostrou que nos controles crescimento micelial ocorreu dentro das paredes celulares em 72 h e que intensa colonização dos tecidos ocorreu em 96 h. Nos frutos tratados a germinação de esporos e a colonização de ferimentos ocorreu 144 h após a inoculação. Numerosos vacúolos de tanino e deposições de material de parede foram observados nas células da epiderme e da hipoderme de amostras tratadas, mas poucos foram encontrados nas amostras dos frutos controle. Exames feitos com microscopia de transmissão mostraram que o crescimento do fungo dentro das paredes ocorreu freqüentemente nos controles, mas em frutos tratados as deposições na parede ocorreram muito freqüentemente e, em alguns casos, bloquearam o avanço do patógeno. Os resultados sugerem que esta proteína pode ativar ou intensificar respostas celulares de resistência em maçãs.

Harpin is a protein produced by Erwinia amylovora that is involved in its pathogenesis of apple. We studied cellular correlates of harpin-induced resistance in apple fruit to blue mold caused by Penicillium expansum using Light (LM), scanning (SEM) and transmission (TEM) electron microscopy. SEM study of wound surfaces showed the fungus colonizing the wounds within 48 h, and profuse colonization of the wound and penetration of the tissue occurred within 72 h after inoculation of control samples. In harpin-treated samples, spore germination and wound colonization were not evident until 96 h. LM showed that intramural mycelial growth appeared as early as 72 h, and intense tissue colonization occurred by 96 h after inoculation in the control samples. In the harpin-treated fruit, spore germination and wound colonization occurred only by 144 h in the treated specimens. Numerous putative tannin vacuoles and appositions were observed in the epidermal and hypodermal cells of inoculated harpin-treated samples, but only a few appeared in control samples. TEM showed that intramural growth of the fungus occurred frequently in the controls. In harpin-treated specimens, wall depositions and appositions occurred very frequently. The results suggest that harpin may trigger or intensify cellular responses in harpin-treated apples.

Estudou-se a interação entre Dicyma pulvinata e F. macrosporum ao microscópio eletrônico de varredura. Esporos de D. pulvinata germinaram na superfície das lesões induzidas por F. macrosporum em plantas de seringueira (Hevea brasiliensis), infectadas artificialmente, fixadas 8 h após a inoculação do antagonista. Aparentemente, os tubos germinativos se alongaram em direção ao patógeno. O contato íntimo entre o hiperparasita e o patógeno foi verificado em amostras fixadas 24 h após a aplicação de D. pulvinata. Ao término do processo, os esporos de F. macrosporum aparentemente invadidos pelo antagonista mostraram-se desintegrados e esvaziados de seu conteúdo. D. pulvinata cresceu sobre as lesões, sobrepondo totalmente o patógeno. Seis dias após a aplicação, conidióforos do fungo antagonista foram observados emergindo das estruturas do patógeno, produzindo esporos em grande quantidade. Verificou-se, também, um possível envolvimento de enzimas hidrolíticas na associação antagonística entre D. pulvinata e o patógeno. Estas informações podem contribuir para elucidar o modo de ação de D. pulvinata, um potencial agente de controle biológico para o mal das folhas da seringueira.

The interaction between Dicyma pulvinata and Fusicladium macrosporum was studied by scanning electron microscopy. Spores of D. pulvinata germinated on the surface of F. macrosporum lesions induced on artificially infected rubber plants were fixed 8 h after inoculation. D. pulvinata germ tubes seemed to elongate toward F. macrosporum. Close contact between the antagonistic fungus and F. macrosporum spores was verified 24 h after application of D. pulvinata. At the end of the process, spores of F. macrosporum seemed to have disintegrated and to be devoid of content. The hyperparasite grew completely over the pathogen. Six to seven days after application of the antagonistic fungus, D. pulvinata conidiophores were observed emerging from F. macrosporum structures with profuse sporulation. Studies have also shown the possibility of D. pulvinata producing hydrolytic enzymes, which could be associated with the control of plant pathogens. This information may help to elucidate some of the modes of action of D. pulvinata, a potential biological control agent for South American leaf blight of Hevea rubber plant.

O objetivo deste trabalho foi investigar prováveis modos de ação da levedura Cryptococcus magnus, que resultam no controle da antracnose (Colletotrichum gloeosporioides) em frutos de mamoeiro na póscolheita. A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para avaliar o efeito da levedura sobre inoculações realizadas após a colheita. Os resultados mostraram que C. magnus é capaz de colonizar a superfície de ferimentos nos frutos e vencer a competição por espaço e, provavelmente, por nutrientes. Além disso, C. magnus produz uma matriz de textura característica que afeta a integridade da hifa do patógeno. A competição por espaço e a produção de substâncias que afetam a integridade das hifas estão entre os mais importantes modos de ação desta levedura.

The objective of this work was to investigate possible modes of action of the yeast Cryptococcus magnus in controlling anthracnose (Colletotrichum gloeosporioides) on post harvested papaya fruits. Scanning electron microscopy was used to analyze the effect of the yeast on inoculations done after harvest. Results showed that C. magnus is able to colonize wound surfaces much faster than the pathogen, outcompeting the later for space and probably for nutrients. In addition, C. magnus produces a flocculent matrix, which affects hyphae integrity. The competition for space and the production of substances that affect hyphae integrity are among the most important modes of action of this yeast.

A maioria dos genes de resistência (R) clonados e caracterizados até o momento contém domínios NBS (nucleotide binding site) e LRR (leucine-rich repeat). Dentro destes domínios, encontram-se "motifs" altamente conservados. Análogos de genes de resistência (RGAs) são marcadores genéticos obtidos por uma estratégia, baseada em PCR, que usa primers degenerados desenhados a partir desses "motifs" altamente conservados dos genes R. Esta estratégia possui a vantagem do elevado grau de conservação da estrutura e seqüência dos aminoácidos observados nos genes R. O objetivo do presente estudo foi realizar uma busca por RGAs em Carica papaya L. e Vasconcellea cauliflora Jacq. A. DC. De três combinações de primers avaliadas, somente uma obteve sucesso na amplificação. O produto da amplificação foi então clonado em pCR2.1TOPO e seqüenciado utilizando os primers universais M13 forward e reverse. Quarenta e oito clones foram seqüenciados de cada espécie vegetal. Das 96 seqüências geradas para cada espécie, retiraram-se as seqüências do vetor e, em seguida, as mesmas foram agrupadas utilizando o programa "CAP3 assembler". A partir do GENEBANK, foi identificado um RGA em C. papaya apresentando um BlastX e-value de 2x10-61 com o "gb|AAP45165.1| putative disease resistant protein RGA3 (Solanum bulbocastanum)". Na extensão do nosso conhecimento, este é o primeiro relato de um RGA na família Caricaceae Dumort. Estudos preliminares de estrutura foram realizados visando à maior caracterização deste potencial "NBS-LRR type protein". Esforços para encontrar novos análogos de genes de resistência devem continuar, principalmente para fornecer bases para o desenvolvimento de plantas de mamão transgênicas com resistência a doenças.

The majority of cloned resistance (R) genes characterized so far contain a nucleotide-binding site (NBS) and a leucine-rich repeat (LRR) domain, where highly conserved motifs are found. Resistance genes analogs (RGAs) are genetic markers obtained by a PCR-based strategy using degenerated oligonucleotide primers drawn from these highly conserved "motifs". This strategy has the advantage of the high degree of structural and amino acid sequence conservation that is observed in R genes. The objective of the present study was to search for RGAs in Carica papaya L. and Vasconcellea cauliflora Jacq. A. DC. Out of three combinations of primers tested, only one resulted in amplification. The amplified product was cloned in pCR2.1TOPO and than sequenced using M13 forward and reverse primers. Forty-eight clones were sequenced from each species. The 96 sequences generated for each species were cleaned of vector sequences and clustered using CAP3 assembler. From the GENEBANK, one RGA was identified in C. papaya showing a BlastX e-value of 2x10-61 to the gb|AAP45165.1| putative disease resistant protein RGA3 (Solanum bulbocastanum). To the extent of our knowledge this is the first report of a RGA in the Caricaceae Dumort family. Preliminary structural studies were performed to further characterize this putative NBS-LRR type protein. Efforts to search for other RGAs in papaya should continue, mostly to provide basis for the development of transgenic papaya with resistance to diseases.

O mofo cinzento, causado por Botrytis cinerea, é doença importante em roseiras (Rosa hybrida) cultivadas em casas de vegetação no Brasil. Como pouco se conhece acerca da epidemiologia da doença nessas condições, avaliou-se a sobrevivência do patógeno em restos culturais e como escleródios. Restos de pétalas, folhas e hastes de roseira inoculados com B. cinerea foram colocados em sacolas de polietileno, que foram misturadas a restos culturais em canteiros de roseiras cultivadas sob estufa plástica. Observou-se alta percentagem de partes com esporulação do patógeno até 60 dias do enterrio das mesmas. A viabilidade do fungo decresceu em hastes e folhas, após 90 dias, e, em pétalas, após 120 dias. Houve esporulação em pétalas por até 360 dias, mas não em hastes ou folhas após 150 ou 240 dias, respectivamente. O patógeno sobreviveu por mais tempo em pétalas. Entretanto, hastes e folhas são importantes fontes de inóculo, por serem produzidas e depositadas em maiores quantidades nos canteiros. Quantificou-se, também, a sobrevivência de escleródios, cuja germinação foi superior a 75% e 50% nos primeiros 210 e até 360 dias, respectivamente. A massa dos escleródios reduziu, mas eles permaneceram viáveis por 360 dias. Não ocorreu produção de escleródios nas folhas e hastes enterradas, mas ocorreu nas pétalas, principalmente após 90 dias do enterrio. A germinação desses escleródios reduziu-se após 120 dias, mas estes permaneceram viáveis até 360 dias. Maior perda de massa e menor viabilidade ocorreram em escleródios produzidos nas pétalas que naqueles produzidos in vitro.

Botrytis blight caused by Botrytis cinerea is an important disease of rose (Rosa hybrida) grown in greenhouses in Brazil. As little is known regarding the disease epidemiology under greenhouse conditions, pathogen survival in crop debris and as sclerotia was evaluated. Polyethylene bags with petals, leaves, or stem sections artificially infected with B. cinerea were mixed with crop debris in rose beds, in a commercial plastic greenhouse. High percentage of plant parts with sporulation was detected until 60 days, then sporulation decreased on petals after 120 days, and sharply decreased on stems or leaves after 90 days. Sporulation on petals continued for 360 days, but was not observed on stems after 150 days or leaves after 240 days. Although the fungus survived longer on petals, stems and leaves are also important inoculum sources because high amounts of both are deposited on beds during cultivation. Survival of sclerotia produced on PDA was also quantified. Sclerotia germination was greater than 75% in the initial 210 days and 50% until 360 days. Sclerotia weight gradually declined but they remained viable for 360 days. Sclerotia were produced on the buried petals, mainly after 90 days of burial, but not on leaves or stems. Germination of these sclerotia gradually decreased after 120 days, but lasted until 360 days. Higher weight loss and lower viability were observed on sclerotia produced on petals than on sclerotia produced in vitro

O mofo cinzento das roseiras (Rosa hybrida), causado por Botrytis cinerea, requer muitas estratégias de manejo para seu controle. Botões de rosa (cv Kiss) foram submetidos ao pulsing com soluções de ácido cítrico, ácido salicílico, sulfato de cálcio, sacarose ou tiossulfato de prata (STS), para avaliar o efeito destes tratamentos sobre a severidade do mofo cinzento e a vida de vaso das flores. As soluções foram aplicadas a hastes colhidas em diferentes tempos em relação ao ponto de colheita, mas a variação no ponto de colheita não produziu efeitos significativos. O tratamento com STS reduziu os valores de área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) e de severidade máxima em 15% e 55%, respectivamente, e aumentou a vida de vaso das flores em 20%. O sulfato de cálcio reduziu consistentemente a AACPD em 66% e a severidade máxima em 88%, além de aumentar a vida de vaso em 37%. Portanto, o pulsing de botões de rosa com soluções de STS e sulfato de cálcio é um tratamento potencialmente útil para reduzir as perdas devidas ao mofo cinzento e para aumentar a vida de vaso das flores.

Gray mold of roses (Rosa hibrida) caused by Botrytis cinerea requires many management strategies for its control. The effect of pulsing rose cv. Kiss with solutions of citric acid, salicylic acid, sucrose, calcium sulfate, and silver thiosulfate (STS) on disease severity and vase life of the flowers was evaluated. The solutions were applied to cut stems at different stages of harvest, the variation in the opening stage of harvest did not affect the results. Pulsing with STS reduced the values of area under the disease progress curve (AUDPC) and of severity of disease by 15% and 55%, respectively, and increased the vase life of the flowers by 20%. Calcium sulfate consistently reduced AUDPC by 66% and maximum severity by 88%, and increased vase life of the flowers by 37%. Therefore, pulsing rose buds with solutions of STS and calcium sulfate is potentially useful in reducing losses due to gray mold after harvest and in extending the vase life.